Серологическая диагностика сифилиса
Диагностика сифилиса основывается на клинических и лабораторных данных. Диагноз сифилиса ставят только после лабораторного подтвер¬ждения, т. е. обнаружения бледных трепонем в отделяемом твердого шанкра, эрозивных, папул при первичном и вторичном сифилисе, и дан¬ных серологического обследования. Серологические реакции являются чрезвычайно ценным методом не только для подтверждения диагноза сифилиса, но и наблюдения за динамикой его течения под влиянием ле¬чения и определения излеченности болезни.
Стандартные компоненты комплекса серологических реакций (КСР) для констатации сифилитической инфекции в настоящее время дополня¬ются трепонемньши реакциями: РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем), РИФ (реакция иммунофлюоресценции). Реакция Вассермана (RW, РВ) основана на феномене связывания комплемента. Для ее поста¬новки используют кардиолипиновый антиген, являющийся холестерини-зированным спиртовым экстрактом из мышц бычьего сердца и облада¬ющий сходными антигенными свойствами с бледной трепонемой.
Реакция Вассермана. Комплемент связывается комплексом (липо-идный антиген и реагин испытуемой сыворотки). Для индикации образо¬вавшегося комплекса используют гемолитическую систему (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка). В группу КСР кроме реакции связывания комплемента,с,кардиолипи-новым и трепонемным антигенами, включена реакция на стекле (экс¬пресс-метод). Выраженность гемолиза при РВ обозначается плюсами:
резко положительная — 4 +; положительная — 3 +; слабоположитель¬ная — 2 + или 1 +; отрицательная — -. Имеет значение и постановка реакции по количественному методу, т. е. с различными разведениями ''сыворотки (1:10; 1:20 и т.д. до 1:320). Многочисленность стандартных серологических реакций объясняется антигенной мозаичностью бледных трепонем, в связи с чем в сыворотке крови больных возникает соответ¬ствующая множественность антител (комплементсвязывающие, агглюти¬нины, преципитины, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию и др.). В каждой стадии сифилиса могут преобладать те или иные антитела и, следовательно, реакции с одними антигенами могут быть уже положительными, а с другими — еще отрицательными. Кроме того, относительная специфичность стандартных серологических реак¬ций вызывает необходимость во избежание диагностических ошибок пользоваться не одной из них, а комплексом реакций. КСР становятся положительными в конце 3-й или в течение 4-й недели после появления твердого шанкра. Эти реакции бывают резко положительными и в значи¬тельном разведении сывороток практически у всех больных вторичным свежим (98—99%), вторичным рецидивным (100%), третичным актив¬ным (70—80%) и третичным скрытым (50—60%) сифилисом. Однако КСР не является строго специфичным комплексом реакций для сифили¬са. Они могут оказаться положительными у больных лепрой, туберкуле¬зом, бруцеллезом, малярией, красной волчанкой, а также при пневмонии, заболеваниях печени, онкологических болезнях, после приема алкоголя, жирной пищи, во время беременности, особенно во второй ее половине, а также в течение первых 2 нед. после родов. С возрастом количество неспецифических ложноположительных результатов КСР увеличивается.
Для обоснованного диагноза сифилиса наряду с данными КСР учи¬тываются клинические данные, результаты исследования на бледную трепонему в манифестных проявлениях первичного и вторичного сифи¬лиса, данные других серологических реакций — РИБТ и РИФ.
РИБТ основана на феномене обездвиживания бледных трепонем ан¬тителами типа иммобилизинов, имеющимися в сыворотке крови боль¬ных сифилисом. В качестве антигена для РИБТ используют взвесь бледных трепонем, полученных из тканей сифилитического орхитд.дро-лцка. Бледные трепонемы после добавления к ним сыворотки крови больного прекращают движение, т. е. происходит их иммобилизация. Ре¬зультаты реакции оценивают в процентах: положительная РИБТ констати¬руется при иммобилизации от 51 до 100% .бледных трепонем, слабопо¬ложительная — от 31 до 50%, сомнительная — от 21 до 30% и отрица¬тельная — от 0 до'' 20%. Реакцию ставят в условиях анаэробиоза. Им¬мобилизины появляются, в сыворотке крови больных позднее, чем дру¬гие антитела, поэтому РИБТ становится положительной позже, чем КСР и РИФ. РИБТ является наиболее специфичной из существующих реакций на сифилис. Ее основное назначение — распознавание ложноположительных результатов при постановке КСР. Это особенно важно в от¬ношении больных, у которых сифилис протекает скрыто без наружных проявлений, но с поражением внутренних органов или нервной системы. Особенное значение имеет РИБТ при распознавании ложноположитель-ных результатов КСР у беременных. Следует помнить, что неспецифи¬ческие положительные результаты РИБТ возможны и у больных саркои- • дозом, красной волчанкой, туберкулезом, циррозом печени и др. Однако при этих заболеваниях РИБТ бывает слабоположительной (от 30 до 50%) и никогда не достигает 100%. При лечении антибиотиками резуль¬таты РИБТ становятся негативными. Поэтому исследования с помощью РИБТ проводятся только через 7 дней, если вводились водораствори¬мые антибиотики, и через 25 дней после окончания лечения дюрантны-ми антибиотиками.
РИФ — более чувствительная реакция, поэтому она бывает поло¬жительной уже в первичном серонегативном периоде сифилиса у 80% больных. По степени специфичности РИФ уступает РИБТ, что не позво¬ляет заменить ею РИБТ, хотя техника ее значительно проще. Реакцию ставят в нескольких модификациях: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-абс. (аб¬сорбированная). РИФ-10 более чувствительна, а РИФ-200 и РИФ-абс. более специфичны. Принцип реакции заключается в том, что специфи¬ческий антиген (бледные трепонемы) соединяют с сывороткой крови больного (антитела) и антивидовой флюоресцирующей сывороткой (кро¬личья сыворотка против глобулинов человека, соединенная с флюорес-цеином, — веществом, светящимся при ультрафиолетовом свете). При положительной реакции в люминесцентном микроскопе можно видеть желто-зеленое свечение бледных трепонем, поскольку они оказываются окружёнными прилепляющимися к ним флюоресцирующими антителами. Степень свечения оценивается плюсами, как и при КСР. Положительная реакция констатируется 4 +, 3 + и 2 +. При степени свечения 1 + и от¬сутствии свечения реакция считается отрицательной. При вторичном си¬филисе РИФ положительна почти в 100% случае. Она всегда положи¬тельна при латентном сифилисе (99—100%), а при третичных формах и врожденном сифилисе положительна в 95—100%..
Экспресс-метод (микрореакция на стекле). В этой реакции, так же как и при КСР, используют кардиолипиновый антиген, одну каплю которого смешивают с 2—3 каплями сыворотки крови обследуемого человека в лунках специальной стеклянной пластины. Реакция протекает по механизму преципитации. Общая продолжительность постановки ре- акции 10—40 мин. Результат оценивают по кддинеству выпавшего осад¬ка и величине хлопьев; выраженность реакции обозначают плюсами: 4 +,3 + и т.д., как и КСР. Микрореакция на стекле менее специфична для больных сифилисом, чем РВ, но несколько превосходит ее по чувстви¬тельности. Ложноположительные результаты при экспресс-методе полу¬чают чаще, чем при РВ. Поэтому этот метод разрешен для применения только как отборочная реакция при массовых обследованиях населения, диспансеризации и обследовании больных в клинико-диагностических ла¬бораториях соматических больниц. Окончательный диагноз сифилиса на основании этого метода устанавливать запрещено. Только экспресс-ме¬тод нельзя применять при обследовании доноров, беременных, а также для контроля после лечения больных сифилисом.
Для диагностики сифилиса можно использовать и другие методы:
иммуноферментный анализ (ИФА) с реакцией микропреципитации (РПМ) или реакцией пассивной гемагглютинации (РПГА) с РМП (в том числе зарубежных аналогов РМП — RPR или VDRL).
При проведении клинико-серологического контроля после специфи¬ческого лечения (для определения эффективности терапии) допускается количественное исследование РМП (изучение титра реакции в динамике).
Иммуноферментный анализ (ИФА, Elisa). Принцип реакции зак¬лючается в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя, с антигеном испытуемой сыворот¬ки крови и выявления специфического комплекса антиген—антитело с помощью антивидовой иммунной сыворотки, меченной ферментом. Чувствительность и специфичность ИФА аналогичны РИФ.
Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Макромодифика¬цию этой реакции именуют ТРНА, микромодификацию — МНА-ТР, ав¬томатизированный вариант— АМНА-ТР. Работники ЦНИКВИ Г.Ф. Тим¬ченко, Н.Н. Басова, В.Н. Беднова разработали отечественный диагности-кум для РПГА из патогенных и культуральных бледных трепонем. Уста¬новлена высокая чувствительность и специфичность РПГА, особенно при поздних формах сифилиса. Простота постановки, низкая стоимость и высокая чувствительность РПГА дает возможность использовать ее в качестве отборочной реакции на сифилис. РПГА ставят в качественном и количественном вариантах, существуют макро- и микромодификации.
IgM-серология. В последние десятилетия широко изучается дина¬мика образования антител в организме больных сифилисом до, в про¬цессе и после окончания лечения. Это вызвано тем, что у пациентов, полноценно леченных по поводу сифилиса, в течение длительного вре¬мени остаются положительные результаты специфических серологичес- ких реакций на сифилис, .что усложняет решение вопроса об излеченно-сти больных, а также постановку диагноза раннего врожденного сифили¬са. Затруднена также дифференциальная диагностика рецидива заболева-, ния и реинфекции. При изучении антйтелообразовния в организме боль¬ных сифилисом было установлено, что первыми после заражения выра¬батываются специфические.IgM, выявляемые уже на второй неделе пос¬ле заражения и достигающие максимальной концентрации в крови на 6— 9 неделе. Через 6 мес. после окончания терапии у большинства боль¬ных в крови они не определяются. На четвертой неделе после инфици-рования организм начинает продуцировать специфические IgG. Этот вид иммуноглобулинов в наибольшем количестве определяется через 1—2 года после заражения. Следует обратить внимание на то, что специфи¬ческие IgM перестают вырабатываться при исчезновении из организма антигена, а секреции IgG продолжается клонами клеток памяти. Кроме того крупные молекулы IgM не проходят через плаценту от матери к плоду, в связи с чем по Их наличию у ребенка судят об его инфицирова-нии бледной трепонемой. Ввиду того, что концентрация в крови специ¬фических IgM закономерно снижается с течением времени, рост титра этих антител может служить вспомогательным признаком наличия реци¬дива заболевания или реинфекции. В 1977 г. была предложена 19S IgM-ТА-абс., затем 19 IgM-TPHA. В основе этих тестов лежит разделение с помощью гель-фильтрации испытуемых сывороток крови на 19S IgM и 7S IgG и выявления первых с помощью иммунофлюресцентного метода и теста гемагглюцинации. В 1980 г. В. Шмидт описал реакцию гемад-сорбции на твердофазном носителе IgM-SPHA, объединившую элементы постановки ИФА и РПГА, а в 1983 г. Е. Линдешмидт предложил IgM-TP-ABS-Elisa. А. Люгер (1981) определил, что для установления актив¬ности специфического процесса в ЦНС важно определение IgM путем
постановки 19S IgM-SPHA.
Особое внимание обращается на сероконверсию при сифилисе у младенцев, матери которых получали противосифилитическое лечение. ''Диагноз врожденного сифилиса нередко ставится ошибочно у здоровых новорожденных на основании выявления у них IgG-AT, которые попада¬ют в кровь ребенка через плацентарный барьер от больных сифилисом матерей. Требуется дополнительное тестирование IgM-AT и использова¬ние комбинаций различных тестов для исключения врожденного сифили¬са у младенцев, рожденных от леченных от сифилиса матерей, при нали¬чии у первых положительных серологических реакций, но отсутствии клинических симптомов.
Реакция пассивной гемагтлютинации в серодиагностике сифилиса (РПГА) в отличие от РИФ и ИФА отличается методической простотой постановки, быстротой получения результатов и высокой воспроизводи¬мостью. Учитывая эти качества РПГА должна использоваться как скрининг-тест при массовых обследованиях на сифилис. Принцип метода зак¬лючается в том, что при взаимодействии сыворотки крови, содержащей специфические антитела, с эритроцитами, сенсибилизированными блед¬ной трепонемой, наблюдается характерная их агглютинация. Сенсибили¬зация эритроцитов может производиться антигенами патогенных и куль-туральных штаммов бледных трепонем. РПГА является ценным диагнос¬тическим тестом на всех стадиях сифилиса, особенно чувствительна при поздних формах сифилиса.
